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动物房环境设计上的要求
动物实验室也叫实验动物房,它是指适宜于饲养、繁育实验动物的建筑物。这类建筑应具有特定的环境要求和实验手段,以保证动物的品质和实验研究的准确可靠性。根据对微生物的控制程度可分为:开放系统、屏障系统和隔离系统。
对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。无菌、已知菌以及无病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养,这种环境,目前国际上通用称为屏障环境,即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开,就如胎鼠在母鼠内一样。这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等类。
A.隔离系统:是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统,用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度,但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。
B.屏障系统:把10000~100000级左右的无菌洁净室作为饲养室,主要用于无病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理,如淋浴、换贴身衣服等。
C.半屏障系统:放宽对屏障系统中人及物出入房间时的管理,平面组成大致与屏障系统相同。
D.层流架系统:笼具放在洁净的水平层流空气中。常用于小规模饲养,但在一般房间进行饲养、操作和处理时有被污染的危险性。可用于半屏障的补充。
E.开放系统:是对人、物、空气等进出房间均不施行*污染的系统,但通常要进行某种程度的清洁管理。
实验动物繁育、生产设施环境指标(静态)。
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11.培养用器皿:
(1)培养器皿:供细胞接种、生长等川的器皿,可由透明度好、*的小性硬质玻璃或*而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培养器皿的优点是多数细胞均可生长,易于清洗、消毒,可反复使用,并且透明而便于观察;缺点是易碎,清洗时费人力。
(b)塑料制培养器皿的优点是一次性使用,厂家己消毒灭菌密封包装,打开即可用于细胞培养操作。
常用的培养器皿:
培养瓶:巾玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容 U(ml)表示,如 250ml、100ml、 25ml等;进口培养瓶则多以底而积(cm2)表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常川的培养皿规格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm 等。
多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大呈样本,易于进行无飽操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各种单层牛.长的细胞在培养器皿中长满时可获得的细胞数,主要是取决于器皿的底表妞积和细胞体积的大小。常用培养器皿及可获得的细胞数(以 Hela 细胞为例)。
(2)培养操作有关的器皿:
a.贮液瓶:主要用于存放或配制各种培养川液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分力各种不同规格,如 1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、 5ml 等。
b.吸管:主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有1ml、2m1、5ml、10ml 等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
c.加样器(移液器):用于吸收、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器,可保证实验样品(或试剂)含量,重复性良好。n前,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供使用者选择,能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。
(3)其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管**部的橡胶吸头,封W各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的器、烧杯和:U:筒以及漏斗,**净工作合使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
m.器械:主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。
(1)常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),川于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代川品,川以放置原代培养之组织小块。
(2)设备:细胞培养实验室除了应配备上述的常川基本设备以外,如有条件,可添
置一些或的设备仪器,以使行效、、深入地进行实验室工作。
例如:
1.酶联*检测仪,可用于进行*学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。
2.温冰箱(-85℃) 便于储存某些试剂及标本。
3.旋转培养器 用丁某些细胞或需要收获大量细胞的培养。
4.荧光显微镜 进行荧光染色样来的观察。
5.流式细胞仪 可及快速检测细胞。
6.用丁检测细胞培养条件的各种仪器,例如为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含M设计的多功能细胞培养分析仪、手提式浓度测定仪等。
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一、植物细胞培养实验室
除了上面那些基本的设备以外,对于植物细胞培养实验室来说,为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留一个通气窗,并安上排气扇。室内温度由空调控制,光照由口光灯控制。天花板和內墻用塑料钢板裝修,地面用水磨石或瓷砖铺设,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。
而且,培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。H光灯一般用 40W,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在 20cm,光照强度为 2000-30001x。
当然,植物培养需要实验室,因此还需要鉴定室和温室。
鉴定室包括细胞学鉴定室和生化分析室。
细胞学鉴定室是为了对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。应配置各种显微镜、照相系统等。
在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。仪器包括离心机、酶联*检测仪、天平、PCK 仪等。温室是用于苗的锻炼和移动,为苗提供满足生长的适宜环境条件。
常用设备有:温室、弥雾装置、荫棚、移栽床、钵、盆、基质等。
二、动物细胞培养室
对于动物细胞培养室来说,要保持无菌条件,因此要设置净化工作室,风淋室,传递窗,过滤器,洁净层流罩,生物柜,**净工作台,其中还要包括紫外灯,电热干燥箱,滤器,高压灭菌器。为了避免培养时出现,会适当在培养液中添加抗生素,因此在培养室闪要有抗生素。
为了满足动物细胞生长所需的条件,在培养室里也要设置純水蒸馏器,纯水仪,培养板,培养瓶,二氧化碳培养箱,培养基,血清。培养基是要根据培养的组织或细胞的类型不同而配制不同的培养基,配制时一定要加血清,而血清可以选用小牛血清。
检測细胞的仪器设备有倒置S 微镜,酶标仪,微孔板震荡器,高速离心机,移液器,保存细胞的仪器设备是液氮罐。
细胞培养实验室还要包括实验室、准备间、缓冲间、培养室。
其中,实验室的要求有以下几点:
①和缓冲间相连,缓冲间內备消毒服裝和鞋,口罩等,入內換上;
②设置 1—2台**净工作台;
③室內空气不流通,有适当的光线,清洁,干燥:
④侧部可设传逆窗,用于物品传递;
⑤照明用荧光灯为好,消毒用紫外线灯;
⑥在室内工作时,动作应轻微。
对于准备间,里面要求有大、小水槽,消毒设备,消毒后的物品和器械保藏柜,烘箱,蒸馏器(包括双蒸,三重蒸馏水),玻璃器皿,培养液,电炉等。
所以,我们可以理解力缓冲间就是上面基本实验室设备中的消毒间,准备间就是消毒间和培养基配制间,而实验室就是无菌操作室。
三,社会价值
细胞培养实验室的社会价值在丁,为实验提供基础,促进细胞培养的发展,细胞培养的好处如下:
1.直接观察活细胞的形态结构和生命活动。用于细胞学、遗传学、*学、实验和学等多种学科研究。
2.直接观察细胞的变化可便于摄影。
3.研究细胞种类如低等到高等到人类、胚胎到成体、正常组织到。
4.便于使用各种技术:相差、荧光、电镜、组化、同位素标记等方法观察和研究细胞状况。
5.是分子生物学和基因工程学的研究对象,也是其主要的组成部分。
6.易于施用物理、化学生物的实验研究。
7.易于提供大量生物性状相似的实验对象,耗资少比较经济。
8.成为生物制品单克隆抗体生产和基因工程等的材料来源。
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构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(一)
细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。H前,**净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。
细胞培养实验室应能进行大方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒火菌处理、储藏。
因此,无论是动物细胞培养室还是植物细胞培养实验室,必定有一下儿种房间。
1.涤问:根据工作量的大小决定其大小。在实验室的一侧设置的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。实验台还应配置水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以购置一台洗瓶机。准备洗液缸,用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。
2.培养基配制间:配备的主要仪器设备有:冰箱、天平、微波炉、pH 计、培养基分裝器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、简、容量瓶、储藏瓶等。
3.滑毒间:配备实验台、高压火菌锅、排风火火设备、过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的手提式簡压灭菌锅,较大的实验室可选用立式向动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭饱锅。如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。
4.无菌操作室:无菌操作室主要川于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲问闪应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖裝修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有**净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
5.培养室。
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