江西10万级 检验科pcr实验室

中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、基因扩增实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
  基因扩增实验又称 PCR实验，是用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法，测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒；由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病毒并具有灵敏度高、特高、快捷、对样品要求低等优点，因此被广为认可，已广泛应用于的诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断；但是这种实验需要有能保证*、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对基因扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和*性起到至关重要的作用。
  基因扩增检验实验室设计的核心问题是如何避免污染，因此实验室的平面布局、空调通风系统设计、气流控制等都是围绕这个核心问题进行的。PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式，同时要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
  标本污染主要有收集标本的容器被污染；标本存放运输时，由于密封不严或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；核酸模板在提取过程中，由于加样污染导致标本间污染；手动提取核酸样本时，污染的手套触摸离心管内盖导致的污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。一个正规的实验室，要时刻注意监测实验室的污染情况。了解实验室有无污染，污染原因，污染程度，以便采取有效措施，防止和*污染，一般通过阴阳性对照检测污染情况。PCR阳性对照对于被建立PCR反应实验室及一般的检验单位都是必需设有的， PCR反应是否成功，PCR阳性对照是一个重要的参考标志；如果阴性对照和阳性对照均成立，说明质量控制成立，实验室未被污染，样本检测结果才有效；如果阴性对照不成立，出现扩增曲线，说明阴性对照被核酸污染，需要追溯污染源。

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  基因扩增实验室必须保持一定的气流状况，通常实验室相对于走廊及非实验室区域保持负压，气流从低危区流向高危区，整体建筑对外界保持正压，以防止有害的未经过过滤处理的气体渗入；实验室内各种设备的位置应有利于气流由“清洁”空间向“污染”空间流动，限度减少室内回流与涡流；各区之间的气流方向应保证由清洁区流向半污染区，由半污染区流向污染区，实验室的清洁区内宜设一间正压缓冲室； 实验室的空气单向流流向应该为：试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区，不得逆向流动。扩增前区保持微（弱）正压状态，扩增后区保持微（弱）负压状态。
  实验人员单向工作流流向应该为：进入各工作区域严格按照试剂储存和准备区→样品制备区→扩增区→扩增产物分析区单一方向进行，不得逆向走动，原则上实验人员应在扩增后区工作后当天不得再返回扩增前区工作；气流组织应采用上送下排方式，送风口和排风口布置应使室内气流停滞的空间降低到小程度；在充分考虑布局合理的前提下，充分考虑送风口、回风口以及排风口的位置，送回排风量的匹配，建立房间之间合理的压力梯度，保证空气有序流动，防止交叉污染；不同洁净等级或不同功能间的压差，通常为5-10pa。
  要充分考虑、物流、污物流的路线，限度的减少室内的回流和涡流，避免污染物扩散到室内，危害人员和环境的*；特别注意排风柜对室内气流面积的影响，在实验室柜、生物*柜附近的区域应尽量避免紊流的出现，紊流在罩边的影响远比在罩前的影响大；气流的压力控制主要有直接压差控制法和余风量控制法。

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  实验室自配试剂去离子水、缓冲液等和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌；尖、反应管等实验耗材应一次性使用。实验应在**净工作台内进行，工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品；实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染；吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染；装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
  PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作；实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处；PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。
  PCR实验室的污染应急处理方法：暂停所有实验操作；清理实验室内所有物品，寻找污染来源；加大实验室的通风；对实验室内所有表面台面、地面及墙面进行消毒；75%酒精空中喷雾；开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间4小时以上；以上措施每日进行，直至污染*；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。

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实验室建设要求
一、生物实验室分级
根据实验室的设计特点、建筑结构和屏障设施等可将生物实验室分为四个防护等级，即生物防护水平一级(biosafety level,BSL-1)~生物防护水平(biosafetylevel,BSL-4)，BSL-1 防护水平和隔离要求，BSL-4 防护水平和隔离要求。BSL-1、 BSL-2实验室属基础实验室，BSL-3 实验室为屏障实验室，BSL-4 实验室为高度屏障实验室。但使用频率，频繁的是BSL-2级实验室，因此，这里需要对BSL-2实验室的建设问题讨论。
二、实验室建设的防护要求
实验室生物防护的基本要求，先是实验室在建设前要委托具有生物实验室的设计单位，进行科学合理的设计，并组织人员对设计方案进行性、科学性、实用性、选址布局的合理性及可行性等方面论证。其次，实验室的建设应由具有生物实验室建设经验的单位承建；再者，在建设过程中的施工质量及用材等方面进行监督与质量控制，应对建成的实验室进行工程质量的验收。生物实验室在平面布局上可通过分区物理隔离措施，将实验污染区和其它清洁区进行隔离，还有是通过气流组织的方式，使实验室形成单向气流(负压梯度)，即空气气流由清洁区向污染区方向流动，达到抑制感染性因子外泄的目的。
三、生物实验室布局要求
1、原则：
毒性强、感染性高的实验室应与办公区域隔离，成立或相对立区域；病原微生物实验室等尽量设在人员流动少的区域(新建立设置) 。
2、实验室流向：
由低毒实验室向高毒高感染性实验室过度，高度高感染性实验室应远离人员活动频繁区域，设在建筑物末端。
3、物流通道尽量分开
人员进出通道和物品通道分开；洁净物品与污染物品通道分开。
4、按项目设立实验室
HIV、PCR、 正常细胞、血清*学/动物、放射等，形成合理分区布局。
5、隔离：通风系统
布局：洁净与污染区域。
维护结构：维护结构隔离。
物理抑制设备：柜、负压通风柜等。
6、实验室层高：
建筑层高：3.5~4.0M
洁净实验室： 2.5~2.6M
生物实验室： 2.5~2.6M
一般实验室：2.7~2.8M
设备层高度(技术夹层)：1.2~1.5M
7、实验室走廊和门宽度：
走廊：1.6~2.0M
门：1.1~1.5M，留有设备门
8、实验室开间模数：
宽3.5~4.0M，净深： 6~9M，7~8M 为宜
9、选址考虑：
一般实验室没有要求；
高等级生物实验室应符合标准要求。
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