中净环球净化可提供细胞实验室、实验室、GMP实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
细胞培养实验室规划要求:
细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响,其实验室设计的原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室。
常用设施及设备
(1)**净工作台:也称净化工作台,分为侧流式,直流式和外流式类。
(2)无菌操作间:一般由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等。
(3)操作间:普通培养箱,离心机,水浴锅,定时钟,普通天平及日常分析处理物。
(4)洗刷消毒间:烤箱,消毒锅,蒸馏水处理器及酸缸等。
(5)分析间:显微镜,计算机及打印机等。
细胞培养实验室规划要求
培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶,培养板,培养皿等。常准备量是使用量的三倍,器皿应选择透明度好,*,利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙-烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种:
(1)液体储存:用于储存各种配制好的培养液,血清等液体,常用规格有500ml,250ml, 100ml等几种.
(2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等几种。
(3)培养皿:用于开放式培养及其它用途,分直径30mm,60mm,120mm等几种。
(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml两种,短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种。
(5)离心管:离心管是细胞培养中使用广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类.前者分别为50ml,30ml,15ml;后者则多为10ml和5ml。
(6)其它:如三角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,器等。
细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同。
人体细胞培养的标准温度为36.5±0.5,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不**过39时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-401小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-411小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-421小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞,个别细胞仍有恢复可能;当温度在43以上1小时,细胞全部。
相反,温度不低于0时,对细胞代谢虽有影响,,但并无伤害作用;把细胞放入25-35时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4数小时后,再回到37培养,细胞仍能继续生长。
细胞代谢随温度降低而减慢。当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而。但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80或-196(液氮)长期保存。
合适的气体环境
气体是哺乳动物细胞培存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。
大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长。但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞适合pH是7.4-7.6。每种细胞都有其适pH值。
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洁净实验室净化空调有多种形式:全新风净化空调系统设过滤,采用**送风下排风,排风出口设净化处理装置。循环风空调箱通过送风管,再经过ULPA过滤器或HEPA过滤器将空气送入洁净室,气流向下送入洁净间,再经竖直回风夹道进入吊顶回风。空气多次进入循环风空调箱过滤,使用不同类型的中过滤器,提供了节约成本和使用能源的选择。应了解实验室通风柜的功能,按排放气体和实验室进行通风系统设计。对实验室房间内通风的*性要足够重视。通风柜的集尘捕捉能力要符合现行标准和规定,保证一定数量的换气次数,让送风气流流向实验室,保持实验室负压;另外,为实验人员创造舒适的工作环境,降低噪声,系统要*控制,易于管理,能稳定、低能耗运行。
有洁净要求的空调机组,初效空气过滤器不能用浸油式,中效过滤器集中设置在空气调机组的正压段,在净化房问设过滤进风口;选择时中效及空气过滤器按额定风量选择,阻力、效率相近的空气过滤器设置在同一洁净室内,空气过滤器的安装应简便可靠,宜于检漏和更换;洁净空调机组的送风机要按净化空调系统的总送风量和总阻力值进行选择。中效、空气过滤器的阻力按其初阻力的2倍考虑取值。设计净化空调系统时还要注意:回、排风口风速≤1m/s,回、排风支管风速≤3m/s,回风总管风速≤3~4m/s;表冷器的迎面风速空凋机组≤2.2m/s,新风机组≤2.5m/s;对送风装置,过滤器送风口实际风量应小于样本给出的风量值;选用定风量控制器时,应注意同一位置上只能使用同一规格的定风量控制器。
通风柜的选择除满足排风和捕捉能力外,还要能根据调节门开度改变排风量,维持表面风速恒定在0.5m/s;在安装调试时应按柜门位移为信号来确定排风量,接受调节门感应器信号后可以计算调节门开启面积风量,送风量跟随排风量即刻变化;实验室内压力梯度控制和小通风量的控制也是很关键的,否则也会导致通风柜排风不稳定。选择通风柜时,要考虑实验室的空间、通风柜的摆放,根据实验内容选择其外形尺寸,体积太大造成浪费,过小则影响使用;通风柜还要远离空气扰动大的地方,远离送风口,避免造成能源浪费;排风管道的没计原则是管内为负压,防止管道废气泄漏,排风管长度越短越好,而且一台风机连接的通风柜越少越好;排风通道尽可能竖直布置,通道越高越好,如需改变风道风速,则应配置相应的变频调节系统,注意排风通道的末端应避开补风管道送气口。
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实验室采用的层流净化系统, 能保证实验室恒温、恒湿、新风量和洁净度要求。该系统通过粗、中、3 种不同孔径的过滤膜, 对空气中不同粒径的尘埃粒子进行过滤, 让尘埃粒子不进入实验室, 从而使附着在尘埃粒子上的微生物,霉菌等不能污染实验室;采用从**部送风、下侧回风的气流组织方式,既能保证洁净度, 又能节约能源;高低洁净度级别的房间维持一定正压差,防止洁净度低的空间污染洁净度高的空间;安装紫外光灯;工作时风淋室吹去附着在工作服及样品外包装上的部分尘埃,传递窗传递干净的实验用品,这些设计能达到无菌室的洁净要求。
实验室天花采用防尘,光滑,耐燃,钢板夹心的洁净板,两边用槽型铝封边,彩钢板与彩钢板之间用中性瓷白玻璃胶密封;实验室净化区地面铺贴PVC地板;地面与墙面,墙面与墙面,墙面与天花板交接均采用半径50mm的铝合金圆弧处理,彩钢板与彩钢板之间用中性瓷白玻璃胶密封,防止有缝滋生霉菌;实验室墙体为采用防尘,光滑,耐燃,钢板夹心的彩钢板墙体固定采用50X30槽型铝做地槽;洁净板隔断之间阳角处装铝合金外圆弧,隔断与隔断之间,隔断与天花之间,隔断与地面之间的阴角封R50铝合金内圆弧,圆角线三维汇交处安装铝合金**球片,门口断开处应收口,阳角柱与天花的交角。
规划设计时洁净区、非洁净区完全分开;办公区域与实验区域的通风系统应立分开;不同科室应设有防污染措施,如缓冲间、气闸室和传递窗等;人、物流通道应立设置,避免混杂和交叉污染;物料、废弃物应设传递窗,并具备消毒功能;办公区域与实验区域应进行物理隔离,工作人员由通道进入实验区。
中净环球净化可提供实验室、细胞实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务,技术、经验丰富、价格实惠。实验室针对的研究对象是具有完整生命体的生物单位,对无菌室要求非常高,因此实验室设计规划建设需要统筹全局,确保实验环境无菌操作,避免微生物及其它有害因素的影响。
动物细胞培养实验室:无菌条件,净化工作室,风淋室,传递窗,过滤器,洁净层流罩,生物*柜,**净工作台,紫外灯,电热干燥箱,滤器,抗生素。细胞生长条件:纯水蒸馏器,纯水仪,培养板,培养瓶,CO2培养箱,培养基,血清细胞检测条件:倒置显微镜,酶标仪,微孔板震荡器,高速离心机,移液器。实验室要求:和缓冲间相连,缓冲间内备消毒服装和鞋,口罩等,入内换上;设置1—2台**净工作台;室内空气不流通,有适当的光线,清洁,干燥; 照明用荧光灯为好,消毒用紫外线灯; 侧部可设传递窗,用于物品传递;在室内工作时,动作应轻微。
植物细胞培养实验室:洗涤间,根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制在30-50㎡;在实验室的一侧设置的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿;实验台还应配置2个水槽,用于清洗小型玻璃器皿,如果工作量大,可以购置一台洗瓶机;准备1-2个洗液缸,用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿;此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。
培养基配制间,面积60平方米左右,配备的主要仪器设备有:冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜,用于储存培养基母液、维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。
培养室为了控制培养室的温度和光照时间及其强度,培养室的房间不要窗户,但应当留一个通气窗,并安上排气扇。室内温度由空调控制,光照由日光灯控制。天花板和内墙用洁净板装修,一般要分两间,一为光照培养室,一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W,固定在培养架的侧面或搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度为2000-3000lx。
无菌操作室主要用于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。消毒间配备实验台、排风灭火设备、过滤设备、干热消毒柜、电炉等。
细胞学室其功能是对培养材料进行细胞学和研究。要求清洁、明亮、干燥,使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染;应配置各种显微镜、照相系统等;生化分析室在以培养细胞产物为主要目的的实验室中,应建立相应的分析化验实验室,以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。离心机、酶联*检测仪、天平、PCR仪等。温室用于苗的锻炼和移植,为苗提供满足生长的适宜环境条件。常用设备有:温室、弥雾装置、荫棚、移栽床、钵、盆、基质等。
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