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中净环球净化可提供无菌实验室、细胞无菌实验室、净化工程的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规*设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般适生长温度为37℃,温差变化不应**过±0.5℃。温度升高2℃时,不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快。因此可控温的恒温培养箱、CO2培养箱是佳选择。恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定;一般的恒温培养箱价格较*,其缺点是只宜于作密闭式培养。
CO2培养箱目前多数的细胞培养室已广泛使用,CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2,常用浓度为5%,易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养;使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在。
中净环球净化可提供实验室、细胞实验室、PCR实验室、检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
实验室平面布局是实验室设计的基础,只有按照功能分区和工作流程的需求做好相应的平面布局规划才能确保后续的水、电、风等的设计,平面布局设计阶段应尽可能地详细考虑工作和发展的需求,合理配置空间,尽量优化整合。除了布局的优化和仪器设备的摆放位置的设计外,还应充分考虑到人员流动与物品流动的方向是否符合工作要求。例如,为了避免实验人员频繁跑动,前处理室应该和仪器室在同一楼层;气瓶室应和气相色谱仪、气质联用仪等仪器在同一楼层;避免楼层过多,每一层都要设置洗涤室、样品室以充分利用空间;生物*室应合理布局洁净区、半洁净区、污染区,以避免交叉污染。
实验室设备清单:
低温冰箱:用于科研研究、用品的保存、生物制品、远洋制品、电子元件、化工材料等材料的低温实验及储存。
冻存盒:细胞冻存用,里面添加异丙醇。
液氮罐:一般可分为液氮储存罐、液氮运输罐两种,大口为细胞冻存、存储用,密闭性好,须有配套提示不锈钢,细胞冻存盒,小口为购买更换液氮运输用。
超声波粉碎仪:将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡*炸裂,从而起到破碎细胞等物质的作用。
离心机:细胞间收集细胞用。
磁力搅拌器:用于加热或加热搅拌同时进行,适用于粘稠度不是很大的液体或者固液混合物的搅拌溶解。
脱色摇床:洗膜用,摇摆式混匀仪,抗体孵育用。
恒温摇床:又称控温摇床、振荡培养摇床、恒温振荡器、恒温摇培养箱,主要用于微生物或细胞的培养和一些生理生化反应等。
**净工作台:提供局部无尘无菌工作环境的单向流空气净化设备,适用于医药卫生、生物制药、食品、科学实验、光学、电子、无菌室实验、无菌微生物检验、植物组培接种等需要局部洁净无菌工作环境的科研和生产。
生物*柜:是为操作原代培养物、诊断性标本等具有感染性的实验材料时,用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料,使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计。
通风柜:可以减少实验者和有害气体接触,防止实验操作中产生的有害气体、臭气、湿气及腐蚀性物质对实验者造成伤害。
二氧化碳培养箱:通过箱体模拟组织内环境对细胞组织培养的一种装置,用于细胞、组织培养和某些微生物的培养,应用于细胞动力学研究、哺乳动物细胞分泌物的收集、抗原的研究和生产、培养杂交细胞生产抗体、体外受精、、组织工程、药物筛选等研究领域。
鼓风干燥箱:干燥用,需可定时,有*警报。
低温恒温槽:保持低温,分子生物使用。
微波炉:DNA琼脂糖凝胶制备用。
水浴锅:细胞间复苏细胞用。
PCR仪:利用DNA聚合酶对特定基因做体外内的大量合成,基本上是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制,普通PCR仪可做梯度和降落PCR,荧光定量PCR仪定量分析。
PH计:酸碱度调节用,需稳定灵敏度高,操作简单,使用时不用校准可直接使用。
纯水机与**纯水机:制备纯水
显微镜:普通倒置显微镜可做细胞间普通细胞观察用,倒置荧光显微镜可做普通细胞观察和荧光分析,带成像系统,相机和成像系统需灵敏度高,需配置电脑。
电光学发光仪:用于检测人体的仪器。
天平:微量称量用,称量质量稍重物品和50ML离心管配平用。
细胞计数仪:细胞计数用。
中净环球净化可提供实验室、第三方检测实验室、微生物实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
细胞培养实验室构建方案
(一)细胞培养实验室的设置
细胞培养实验室与其他一般实验室的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。
细胞培养实验室应分为以下几个区:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
1.无菌操作区
(1)无菌操作室:无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,尽量能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰,一般地理位置在部分。
理想的无菌操作室应划为三部分:
a)更衣室---供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b)缓冲间---位于更衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
c)无菌操作间---于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其**部不宜过高(不**过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
(2)净化工作台:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。一般培养室使用的净化工作台主要有两种: a) 侧流式或称垂直式b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理(大致相同) ---通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
净化工作台应用注意:
(1)净化工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内,以免尘土过多易使过滤器阻塞,降低净化效果,缩短其使用寿命。
(2)新安装的或长期未使用的工作台,工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。
(3)使用净化工作台前,应先用75%酒精擦洗台面,并提前以紫外线灭菌灯照射30~50min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
(4)净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流流型不受干扰。
(5)注意净化区内气流的变化,一旦感到气流变弱,如酒精灯火焰不动,加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞,应及时更换。一般情况下,过滤器三年更换一次。更换高过滤器应请人员操作,以保持密封良好。粗过滤器中的过滤布(无纺布)应定期清洗更换,时间应根据工作环境洁净程度而定,通常间隔3-6个月进行一次。
(6)净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。
(7)净化工作台应定期进行功能测试,检查净化工作台各项工作指标是否达到要求,例如进行无菌试验,定期检查台面空气的洁净度是否达标。
**净工作台的无菌程度检查,**净工作台在消毒处理后,无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数;取直径约90mm平皿,在**净工作台内点燃酒精灯,在酒精灯旁,以无菌操作,将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml,制成平板,在30~35℃预培养48小时,无菌后将平板3个,以无菌方式带入**净工作台内左、中、右各放一个;打开平皿盖扣置,平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好,置30~35℃培养48小时,取出检查,100 级清洁度要求: 3个平皿上生长的菌落数平均不得**过1个。
**净工作台应定期请有关部门检查其洁净度,应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5衸的粒数不得**过3.5个/升;空气流量应控制在0.75~ 1. 0m3/s;菌落数平均<1个,可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2.孵育区
本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
3.制备区
在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4.储藏区
主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,此环境也需要清洁无尘。
5.清洗和消毒灭菌区
清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
中净环球净化可提供实验室、细胞实验室、微生物实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
在控制实验室通路的同时,还应设置一些预备区,如接受样品或标本,准许进入实验室人员和参观者的通道;通过工作人员、自动传输、风力系统或采取必要的隔离和负压措施防止生产工艺产生的污染物质向周围扩散;采用产尘少、不易滋生微生物的室内装修材料及家具;减少人员及物料带入室内的污染物质;维持生产环境相对于室外或净化等级要求低的邻室有一定的压差。还应考虑实验室空间的扩展需要,将实验室设计为可向外扩展性,以满足实验室未来发展的空间有拓展的需要;运输和电脑网络系统分别用于实验室内和实验室与单位各科之间样品或标本运输和信息交流。
人员净化用室主要包括雨具存放间、管理室、换鞋室、存外衣室、盥洗室、洁净工作服室、空气吹淋室、洗衣间、工作服干燥间等,具体设计时根据需要设置上述有关人员净化用室;人员净化用室一般与生活用室厕所、淋浴室、休息室、就餐室等按人员净化程序组合在一起。由于人净用室是根据生产需要控制人体污染的重要手段,因此净化工程设计中须特别注意人净用房的排列顺序,使工作人员不致因行走顺序上的逆转形成而造成交叉污染。实验室的设计和大小应考虑*性,满足紧急*和疏散出口的建筑规则,针对各实验室情况配备*设备。距危险化学试剂30米内,应设有紧急洗眼处和淋浴室。所有的实验室和与污染物直接接触的地方均应安装洗手池,将洗手池设在出口处。
实验室所有仪器所需电量和所需电插座数量,布局合理,使用*和方便。如果实验室用于分离微生物和分子生物学实验区域,应能有效地保护工作人员和标本免污染;固定紫外灯距地面的距离不要**过2.1米,紫外灯的数量应根据实验室空间决定,使用紫外照明设备时,必须确信物体表面墙体表机的涂料、工作台面等能经受紫外光的漂白作用。
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