中净环球净化可提供动物房,动物实验室,动物洁净室,动物无菌室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。 构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(三)
11.培养用器皿:
(1)培养器皿:供细胞接种、生长等川的器皿,可由透明度好、*的小性硬质玻璃或*而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培养器皿的优点是多数细胞均可生长,易于清洗、消毒,可反复使用,并且透明而便于观察;缺点是易碎,清洗时费人力。
(b)塑料制培养器皿的优点是一次性使用,厂家己消毒灭菌密封包装,打开即可用于细胞培养操作。
常用的培养器皿:
培养瓶:巾玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容 U(ml)表示,如 250ml、100ml、 25ml等;进口培养瓶则多以底而积(cm2)表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常川的培养皿规格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm 等。
多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大呈样本,易于进行无饱操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各种单层牛.长的细胞在培养器皿中长满时可获得的细胞数,主要是取决于器皿的底表妞积和细胞体积的大小。常用培养器皿及可获得的细胞数(以 Hela 细胞为例)。
(2)培养操作有关的器皿:
a.贮液瓶:主要用于存放或配制各种培养川液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分力各种不同规格,如 1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、 5ml 等。
b.吸管:主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有1ml、2m1、5ml、10ml 等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
c.加样器(移液器):用于吸收、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器,可保证实验样品(或试剂)含量,重复性良好。n前,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供使用者选择,能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。
(3)其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管**部的橡胶吸头,封W各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的器、烧杯和:U:筒以及漏斗,**净工作合使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
m.器械:主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。
(1)常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),川于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代川品,川以放置原代培养之组织小块。
(2)设备:细胞培养实验室除了应配备上述的常川基本设备以外,如有条件,可添
置一些或的设备仪器,以使更行效、更、更深入地进行实验室工作。
例如:
1.酶联*检测仪,可用于进行*学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。
2.温冰箱(-85℃) 便于储存某些试剂及标本。
3.旋转培养器 用丁某些细胞或需要收获大量细胞的培养。
4.荧光显微镜 进行荧光染色样来的观察。
5.流式细胞仪 可更及快速检测细胞。
6.用丁检测细胞培养条件的各种仪器,例如为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含M设计的多功能细胞培养分析仪、手提式浓度测定仪等。
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构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(一)
细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。H前,**净工作台的广泛使用,很大程度上方便了组织细胞培养工作,并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。
细胞培养实验室应能进行大方面的工作:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒火菌处理、储藏。
因此,无论是动物细胞培养室还是植物细胞培养实验室,必定有一下儿种房间。
1.涤问:根据工作量的大小决定其大小。在实验室的一侧设置的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。实验台还应配置水槽,用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大,可以购置一台洗瓶机。准备洗液缸,用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。
2.培养基配制间:配备的主要仪器设备有:冰箱、天平、微波炉、pH 计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、简、容量瓶、储藏瓶等。
3.滑毒间:配备实验台、高压火菌锅、排风火火设备、过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的手提式简压灭菌锅,较大的实验室可选用立式向动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭饱锅。如果没有条件的话,可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风,地面要便于清洁、防滑。
4.无菌操作室:无菌操作室主要川于实验材料的接种操作,所以又叫接种室。通常由里外两间组成,外间是缓冲间,用于准备工作,还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲问闪应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修,工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有**净工作台,紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。
5.培养室。
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动物实验室级别及检查标准
1.1动物实验室级别
一级普通动物(CV),系指微生物不受控制的一般动物。要求排除共患病的病原体和少数的实验动物烈的病原体。为防止病,在实验动物饲养和繁殖时,要采取一定的措施,应保证其用于测试的结果具有反应的重现性(即无论不同的操作人员,在不同的时间,用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验,都能获得几乎相同的结果。
二级清洁动物(CL),要求排除共患病及动物主要病的病原体。
无病原体动物(SPF),要求到二级外,还要排除一些规定的病原体。其与的方法,可使用空气过滤器法、紫外线法、三甘醇蒸气喷雾法及氯化锂水溶液喷雾法。
无菌动物(GF)或栖生动物(GN),无菌动物要求不带有任何用现有方法可检出的微生物。栖生动物要求在无菌动物体上植入一种或数种已知微生物。
1.2四类实验动物的病理检查标准
在病理学检查上,四类实验动物也有不同的病理检查标准。
一级外观健康,主要不应有病灶。
二级除一级指标外,显微镜检查**级微生物病原的病变。
无病原体动物,**、微生物病原的病变。
不含二、微生物病原的病变,脾、淋巴结是无菌动物组织学结构。
1.3动物实验室建设的要求
对不同级别的实验动物在动物房设计上和管理上则有不同的要求。
无菌、已知菌以及无病原体动物都需要在无菌或尽可能无菌的环境里饲养,这种环境,目前国际上通用称为屏障环境,即用一道屏障把动物与周围污染的环境隔开,如胎鼠在母鼠内一样。
这种环境从控制微生物的角度分为隔离系统、屏障系统、半屏障系统、开放系统和层流架系统等类。
A隔离系统:是在带有操作手套的容器中饲养动物的系统,用于饲养无菌动物和栖生动物。内部保持按微生物要求的100级的洁净度,但其设置的房间及操作人员不必按无菌室考虑。
B屏障系统:把10000~100000级左右的无菌洁净室作为饲养室,主要用于无病原体动物的长期饲养和繁殖。入室施行严格管理,如淋浴、换贴身衣服等。
C半屏障系统:放宽对屏障系统中人及物出入房间时的管理,平面组成大致与屏障系统相同。
D层流架系统:笼具放在洁净的水平层流空气中。常用于小规模饲养,但在一般房间进行饲养、操作和处理时有被污染的危险性。可用于半屏障的补充。
E开放系统是对人、物、空气等进出房间均不施行污染的系统,但通常要进行某种程度的清洁管理。
中净环球净化可提供动物房,动物实验室,动物洁净室,动物无菌室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。 浅析实验动物房的工程设计(二)
具体布局
3.1 单走廊模式的实验动物房
3.1.1 单走廊模式的实验动物房布局
单走廊模式的动物房是人员、物品、动物、笼具共用一条走廊,布局简洁、流线明确,大大减少了所 需通道的面积,使得房间的可用面积变大,节约运行成本。
单走廊模式的实验动物房布局如图1所示,包括人员的进出流线、动物进入的流线、物品(如饲料、垫料、笼具)的进出流线、废弃物品的退出流线。
由于单侧走廊的动物房设置所有的实验操作间的 门均是开向走廊,因此走廊上汇集了所有的人员、 物品、动物、笼具的进出流线,导致清洗前后的笼具均由同一走廊传送。
单走廊模式**的优点:
提高空间利用率, 并且将车间的面积尽可能利用布置为房间,使得建 造成本降低。
单走廊模式的缺点:
各种流向在一条走廊上, 需要通过日常的严格来尽量避免交叉污染。
目前,这种单走廊形式适用于动物饲养规模较小和普 通环境要求下的动物实验房。
3.1.2 单走廊模式的实验动物房压差
以正压屏障环境下的单走廊模式为例,需要保证动物的生产区、动物实验区压力。也就是说, 房间压力**走廊,气流由房间流向走廊,保证房间不受影响。
3.2 双走廊模式的实验动物房
3.2.1 双走廊模式的实验动物房布局
双走廊或多走廊的实验动物房是人员、物品、动物、笼具先通过洁净走廊进入,再从污物走廊退出。其流线明确,减少了交叉污染。
由于双走廊模式的动物房设置所有的实验操 作间的门均是开向两侧的走廊,因此洁净走廊上主要是人员、物品、动物、笼具的进入流线,而退出的人员、物品、废弃物等从污物走廊退出。流线区分明确,可程度地避免交叉污染。
双走廊模式**的优点:减少交叉污染,流 线清晰,易于管理,便于通过设计认证。
双走廊模式的缺点:与单走廊模式相比,浪费 厂房面积。
为了提高面积的使用率,可以将双走廊 模式的动物房设置为中间洁净、两侧污染的三走廊 模式。
目前这种形式适用于各种SPF的小鼠和 的动物实验房。
3.2.2 双走廊模式的实验动物房压差
以正压屏障环境下的双走廊模式为例,需要保证洁净走廊的压力**动物生产区、实验区的压 力;动物生产区、实验区的压力**污物走廊。也就 是说,压力从高到低,气流由洁净走廊流向房间,再由房间流向污物走廊。
实验动物房的工程设计要点
4.1 建筑材料
实验动物房的建筑墙板和顶棚的材料,可采用 铝蜂窝的夹心彩钢板,圆弧角采用铝合金材质制成。地面采用PVC材质,耐酸碱,受损后易于修补。
4.2 空调系统
为了**实验动物房的洁净环境,实验动物房 的空调系统采用初、中、过滤模式。
换气次数根据实验室面积、高度和内部发热情况,通过空 调的送风和排风实现。由于实验动物房是全空气系 统,因此房间大小合理、紧凑即可,并设计合适的换 气次数以保证洁净级别要求。另外,空调系统尽量考虑房间的四个角同时回风,以保证内部气流的均 匀。对于全空气系统,采用能量回收装置,基本可以 收回50%~60%的能量。
4.3 自控和报警系统
为了确保房间的温湿度、压力和换气次数符合 要求,需要对关键房间进行,并自动采集、记录、存储数据等,如果指标不符合要求,则需要报警 提示 。
3 结语
实验动物房在设计建造过程中应综合考虑各种因素对实验动物的影响。
(1)在满足生产使用部门 需求的同时,结合工程建设的特点综合分析。
(2)实验动物房在建设时,要满足各种规范要求,选择适 合的工艺布局形式,严格控制人员、物品和动物等流向,避免交叉污染,确保动物房建设完成后顺利 通过认证。
(3)从节约建设成本和运行成本的角度, 严格把控施工材料质量。
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