pcr实验室建设要求 无菌室车间设计公司

中净环球净化可提供医学实验室、PCR实验室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。
PCR实验室建设条件、功能作用、建设方法区域划分！　
PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR是聚合酶链式反应的简称。是一种分子生物学技术，用于放大特定的DN段，可看作生物体外的DNA复制。通过DNA基因追踪系统，能*掌握患者体内的病毒含量，其度高达纳米级别，检测乙肝病毒在患者体内存在的数量、是否复制、是否、性有多强、是否必要服药、肝功能有否异常改变能及时判断病人适合使用哪类抗病物、判断如何、给提供了可靠的检验依据。
一、条件
1、必须拥有标准的的PCR荧光实验室；
实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出。
由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它有特更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。本文试其定量原理、方法及参照问题作一介绍。
2、检测设备必须符合标准PCR荧光实验室设置要求；
荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。
3、必须通过检验中心的验收和认证；
4、检测人员必须通过临检中心业务培训并取得合格证书；
PCR实验室内工作人员必须参加由或各省检验中心举办的基因扩增培训班，并持证上岗。PCR实验室通过验收，实验室至少必须应有两个以上持有“基因检测”。PCR实验室必须建立严格的实验室管理制度、建立标准化操作程序(SOP)、建立系列质量管理文件等，确保实验室日常运行符合的要求，确保检测结果准确、确保实验室卫生，确保实验室长期稳定运行。
5、必须在无菌无尘环境下进行操作。
二、功能
能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控，并结合抗HBV与T细胞*来打破*耐受，阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒，解决了乙肝病毒易变异、耐药，病毒复制模板难以，人体*耐受状态不易打破等医学难题，能*，而且有效抑制乙肝病毒复制，明显加快e抗原、抗体的血清转换速度，杀灭血液及肝细胞内的病毒，为防止再感染提供了长期保护，有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。

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DNA检测实验室格局规划
实验室高度为2.6-3米，各功能间将根据其不可逆工艺流程、实际用途、设备摆放及人性化等因素通盘布局划分。
01功能分区
普通实验区--法医物证常规检验室、法医物证存储室、受案室、检材室、骨骼提取实验室、数据比对分析室、紧急淋浴洗眼间、洁具间、洗衣间、测序仪UPS机房；
实验区 / 污染控制区--更鞋 / 缓冲走廊、更衣 / 缓冲间、现场物证DNA提取间（30-50㎡）、嫌犯血样DNA提取间(15-30㎡）、试剂混配间(15-30㎡）、PCR扩增间(15-30㎡）、扩增产物测序间(15-30㎡）。
污染控制区基本格局
方案1、各功能间相互串通，即用套间方式进行/物流，此案应严禁采用，先从房间格局上避免交叉污染；
方案2、设置立缓冲间为（尤其是DNA提取间、PCR扩增间、试剂混配间），且/物流分道，流程相临间应设置物流传递窗。
方案3、设置共用缓冲间/缓冲走廊为亦可(本次图纸采用的方式)。
02气流组织
双道门的门缝处分别向缓冲间内流动，用合理的气流组织方式避免各功能间的交叉污染。
1、原始试剂混配室应为正压间，在微环境百级**净台内操作，须防止其它程序功能间对本操作间的污染；
2、DNA提取室应为微负压间，须设置排风系统，以防止核酸提取时可能产生的气溶胶对人员的侵害和对其它程序功能间的扩散污染；
3、PCR扩增室应为微负压间，须设置排风系统，以防止大量扩增产物对其它程序功能间的扩散污染；
4、测序室应为微负压间，须设置排风系统，以防止扩增产物在电泳测序过程中的扩散污染；同时因3130分析仪散热量较大，会提高室内温度3-5℃；
5、试剂混配室、DNA提取室、PCR扩增室、检测室如设置缓冲间，功能间内可均为正压，而在缓冲间内设置负压，气流从其双道门的门缝处分别向缓冲间内流动，用合理的气流组织方式避免各功能间的交叉污染；
6、送风口为**送风，侧下回/排风（竖井、夹道、缓冲间）方式。
通风空调
实验区各主要功能间采用非单向流、过滤、各自立送/回风、集中（或立）新/排风的净化系统，室内空调全部选用悬挂风管式商用空调，通过新风/送风/回风管道、风阀等连接悬挂式袋式中效净化加压风机箱，避免集中回风后再循环可能造成的空气交叉污染，同时亦可避免如采用全新风全排风方式而造成的室内热量/冷量大量流失、难以控制和洁净度无法保证的技术问题，从而提高制热/制冷效果，降低运行能耗；主要功能间内或其配套的缓冲间均加装排风装置，以防止室内污染空气外漏它屋而造成的交叉污染，达到置换室内空气。

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实验室污染的处理。
1.标本污染生物柜的操作台造成局限污染时：立即用吸水纸覆盖，并使用0.55%含氯剂进行喷洒。液需要现用现配，内使用。
2.标本倾覆造成实验室污染时：保持实验室空间密闭，避免污染物扩散。立即使用润湿有0.55%含氯剂的毛巾覆盖污染区。必要时（如大量溢撒时）可用加热熏蒸实验室，剂量为2g/m³，熏蒸过夜；或20g/L液用气溶胶喷雾器喷雾，用量8ml/m³，作用1-2小时；必要时或用-熏蒸：8g/m³，放入耐热耐腐蚀容器（陶罐或玻璃容器），后加入（40%）10ml/m³，熏蒸4小时以上。熏蒸时室内湿度60%-80%。
3.清理污染物时：严格遵循活病毒生物操作要求，采用压力蒸汽处理，并进行实验室换气等，防止次生危害。

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PCR实验室建立方法
1、建立样品准备区
这个区域用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：⑴PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。⑷DNA样品应该用有的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶。⑸大体积样品应该用单包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要用于样品准备间，经常清洗。
2、样品准备和RNA-PCR 
RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、建立前PCR区
该去用于准备各种反应，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、PCR实验室试剂的操作
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。⑵所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前PCR区建立PCR混合物
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物，以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济，可以考虑分装保存够的PCR成分。⑶作为一个规则，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且，你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。⑸当做阳性对照时，有两个理由决定了应该使用少数量的核酸。⑹由于必须有对照反应，对照模板的特点应该予以考虑。
6、控制污染的方法
已设计出很有力的酶学方法用来一种形式的污染-使用UNG，这一技术能有效地由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线，这种方法不能完全污染问题，但可以将污染降低几个数量级。
7、后PCR区PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是用于这一目的，决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。
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