岳阳 细胞培养GMP无尘室洁净工程

中净环球净化可提供实验室工程、细胞实验室工程、净化车间的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
  无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。理想的无菌操作室应划为三部分：更衣室、缓冲间、无菌操作间。更衣室供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩；缓冲间位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。无菌操作间于无菌操作、细胞培养；其大小要适当，且其**部不宜过高，不**过2.5m，以保证紫外线的效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。  
  清洁和消毒区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。储藏区：主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。孵育区：本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。制备区：在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。 
  目前绝大部分细胞实验室使用**净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向**向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌，工作台结构为封闭式；外流式工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，工作台结构为开放式，但进行有害物质实验操作对操作者不利。**净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度，符合要求的**净工作台其洁净度应达到100级，用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应**过3.5个/L；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；菌落数平均<1个，根据无菌状况必要时需要置换过滤器。

中净环球净化可提供细胞实验室、实验室、GMP实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
细胞培养实验室规划要求：
细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响，其实验室设计的原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁，空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。
常用设施及设备
(1)**净工作台：也称净化工作台，分为侧流式，直流式和外流式类。
(2)无菌操作间：一般由更衣间，缓冲间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱，离心机，倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱，冷藏器及消毒好的无菌物品等。
(3)操作间：普通培养箱，离心机，水浴锅，定时钟，普通天平及日常分析处理物。
(4)洗刷消毒间：烤箱，消毒锅，蒸馏水处理器及酸缸等。
(5)分析间：显微镜，计算机及打印机等。
细胞培养实验室规划要求
培养器皿
常用细胞培养器皿有培养瓶，培养板，培养皿等。常准备量是使用量的三倍，器皿应选择透明度好，*，利于细胞粘附和生长的材料，常用一次性聚苯乙-烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面几种：
(1)液体储存：用于储存各种配制好的培养液，血清等液体，常用规格有500ml，250ml， 100ml等几种.
(2)培养瓶：根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异，用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀，便于细胞贴壁生长和观察，瓶口要大小一致，口径一般不小于1cm，允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml，100ml，50ml，25ml，10ml等几种。
(3)培养皿：用于开放式培养及其它用途，分直径30mm，60mm，120mm等几种。
(4)吸管：常用的有长吸管和短吸管两类，长吸管也称刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体。常用1ml和10ml两种，短吸管也叫滴管，分弯头和直头两种。
(5)离心管：离心管是细胞培养中使用广泛的器皿，根据用途不同形态各样，常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类.前者分别为50ml，30ml，15ml；后者则多为10ml和5ml。
(6)其它：如三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，器等。
细胞培养温度
维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定而适宜的温度。不同种类的细胞对培养温度要求也不同。
人体细胞培养的标准温度为36.5±0.5，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不**过39时，细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-401小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在40-411小时，细胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复；41-421小时，细胞受到严重损伤，大部分细胞，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43以上1小时，细胞全部。
相反，温度不低于0时，对细胞代谢虽有影响，,但并无伤害作用；把细胞放入25-35时，细胞仍能生存和生长，但速度减慢；放在4数小时后，再回到37培养，细胞仍能继续生长。
细胞代谢随温度降低而减慢。当温度降至冰点以下时，细胞可因胞质结冰受损而。但是，如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油)，可在深低温下如-80或-196(液氮)长期保存。
合适的气体环境
气体是哺乳动物细胞培存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。
大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞生长。但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长，如成纤维细胞适合pH是7.4-7.6。每种细胞都有其适pH值。

中净环球净化可提供实验室、细胞实验室、检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
  实验室采用的层流净化系统, 能保证实验室恒温、恒湿、新风量和洁净度要求。该系统通过粗、中、3 种不同孔径的过滤膜， 对空气中不同粒径的尘埃粒子进行过滤, 让尘埃粒子不进入实验室, 从而使附着在尘埃粒子上的微生物，霉菌等不能污染实验室；采用从**部送风、下侧回风的气流组织方式，既能保证洁净度， 又能节约能源；高低洁净度级别的房间维持一定正压差，防止洁净度低的空间污染洁净度高的空间；安装紫外光灯；工作时风淋室吹去附着在工作服及样品外包装上的部分尘埃，传递窗传递干净的实验用品，这些设计能达到无菌室的洁净要求。
  实验室天花采用防尘，光滑，耐燃，钢板夹心的洁净板，两边用槽型铝封边,彩钢板与彩钢板之间用中性瓷白玻璃胶密封；实验室净化区地面铺贴PVC地板；地面与墙面，墙面与墙面,墙面与天花板交接均采用半径50mm的铝合金圆弧处理，彩钢板与彩钢板之间用中性瓷白玻璃胶密封,防止有缝滋生霉菌；实验室墙体为采用防尘，光滑，耐燃，钢板夹心的彩钢板墙体固定采用50X30槽型铝做地槽；洁净板隔断之间阳角处装铝合金外圆弧,隔断与隔断之间，隔断与天花之间，隔断与地面之间的阴角封R50铝合金内圆弧，圆角线三维汇交处安装铝合金**球片，门口断开处应收口，阳角柱与天花的交角。
  规划设计时洁净区、非洁净区完全分开；办公区域与实验区域的通风系统应立分开；不同科室应设有防污染措施，如缓冲间、气闸室和传递窗等；人、物流通道应立设置，避免混杂和交叉污染；物料、废弃物应设传递窗，并具备消毒功能；办公区域与实验区域应进行物理隔离，工作人员由通道进入实验区。

中净环球净化可提供实验室、细胞实验室、检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
 实验室设计应遵循一般平面设计原则：分区明确、流线清晰、可持续性。功能区的划分有：更衣室、样本接收室、制备室、洗消室、洁净缓冲间、物料存储室、储存室、废弃物暂存间、培养室、离心间等。每一类分析的操作间应有单的、适宜的空间操作区域，送检样品的接收和储存区域，废弃物存放区域，物品的存放区域；满足空间、设施、设备、洁净度的要求和质量控制区应与制备区实施物理隔离。
  细胞实验室应有严格的流程控制，符合各操作的实验流程。在设计流程中注意控制人物流走向、样本走向、成品走向和污物走向等，避免交叉污染等情况。实验室设计时必须的几个重点区域：核心区：制备间及细胞培养；区：准备，清洁，消毒等其他功能区域；存储区域做样品的存储；更鞋缓冲人、物流区域。
  实验室内严禁烟火，也不能在实验室内点火取暖，严禁闲杂人员入内；充分熟悉*用具，如灭火器、急救箱的存放位置和使用方法，并妥加爱护；能产生有毒气体的实验不能进入细胞实验室；实验完毕后，对实验室作一次系统的检查，随时关好门窗，防火、防盗、防破坏；实验开始前，检查仪器是否完整无损，装置是否正确稳妥；实验进行时，应该经常注意仪器有无漏气、碎裂，反应进行是否正常等情况；要注意*用电，不要用湿手、湿物接触电源，实验结束后应及时切断电源。
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