PCR二级生物实验室 洁净无菌实验室改造预算

中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、核酸检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
PCR实验室主要设备
试剂准备区 
仪器设备主要有冰箱、**净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天平除了要外，还应有定期校准。   试剂分装应在**净台中进行  扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。
标本制备区 
仪器设备主要有生物*柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等 
扩增区 
扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、**净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩增仪需进行校准。并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。
分析区 
本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能**过主实验室的八分之一，这是有规定的。 
一些琐碎的、不可忽略的设计
1.实验室空调通风系统设计及压力控制 
PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以**各实验区的压力要求。
2.污染的预防与控制  
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有以下几种污染类型：扩增产物的污染；天然基因组DNA的污染；试剂的污染以及标本间的污染。由于一旦发生污染，实验就必须停止，直到找到污染源为止，而且实验结果必须作废，需重新进行实验。所以发生污染后再围绕实验室来寻找污染源不但耗时而且繁琐，浪费人力物力。因此要避免污染，先应是预防，而不是排除。
PCR实验室不可缺少的严格管理
（1）严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得随意进出实验室，有条件的情况下要设置立的通道和进出整个实验区的门； 
（2）尽量减少在实验区内不必要的走动以减少交叉污染的可能性。 
（3）扩增产物分析区是主要的扩增产物污染来源，废液不能在实验室中倾倒，必须经消毒液浸泡消毒后在远离实验室的地方弃掉，用过的吸头等一次性材料也应经消毒液浸泡消毒后统一处理，如焚烧等； 
（4）扩增产物分析区可能会用到某些可致基因突变和有毒物质，应特别注意实验人员的*防护。3.5完备的实验室配套设施  完备的实验室配套设施是**实验工作的必要条件，应根据各个实验室实验内容的不同配备相应的设备和仪器，如**净工作台、离心机、加样器等。

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  由于PCR实验室在加样操作过程中可能产生气溶胶，为避免气溶胶扩散出去对外界造成污染，同时为了避免各房间之间通过风管系统交叉污染，实验室建议采用全新风系统；新风经热湿处理及初效、中效、或亚过滤后送入室内;各房间排风口单设置或亚过滤器。当房间无工艺设备排风时，可通过换气次数，工艺操作间换气次数为12~15次/h，缓冲间6~8次/h，计算得出房间送风量，然后根据缝隙法得出房间排风量;当房间有工艺设备如生物*柜排风时，比较设备排风量与满足换气次数所需送风量，取两者之间的较大值，一般情况下，设备排风量较大，然后可根据缝隙法得出房间送风量。
  气流组织上，PCR实验室空调系统通常采用上送下排式的非单向流送风方式。房间上部送风口尽量均匀布置，且与生物*柜操作面或其他有气溶胶操作地点的正上方保持一定距离;房间下部利用室内排风夹道上设置的排风口排风，排风口底部距地面0.1m，排风夹道需设置于室内被污染风险的区域，排风口前面不应有障碍物遮挡。
  PCR实验室内通常有生物*柜、通风柜等生产设备，这类设备排风量大且使用时间有间隔性，并不与空调系统运行时间一致，这就导致有这些设备的房间在设备启停的时候很*失压，原本正常的压力梯度瞬间就破坏了。这正是PCR实验室空调系统设计的难点所在。温湿度控制：夏季调节表冷盘管动态压差平衡调节阀的开度以控制室内温湿度，湿度优先;当为了调节室内湿度而造成温度过低时，开启加热盘管以控制室内温度；冬季调节加热盘管动态压差平衡电动调节阀的开度以控制室内温度，调节加湿器的开度以控制湿度。
  压力及变频控制：在空调系统各房间送风支管上设置压力无关型定风量阀，无工艺设备排风房间的排风支管上设置压力无关型定风量阀，从而恒定房间的风量以控制房间压力；在有工艺设备排风房间的排风支管上设变风量阀，根据房间内压差动作，以控制房间压力；需排风的工艺设备如生物*柜排风支管上设变风量阀，根据设备开启度调节设备排风量。

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实验室建设要求
一、生物实验室分级
根据实验室的设计特点、建筑结构和屏障设施等可将生物实验室分为四个防护等级，即生物防护水平一级(biosafety level,BSL-1)~生物防护水平(biosafetylevel,BSL-4)，BSL-1 防护水平和隔离要求，BSL-4 防护水平和隔离要求。BSL-1、 BSL-2实验室属基础实验室，BSL-3 实验室为屏障实验室，BSL-4 实验室为高度屏障实验室。但使用频率，频繁的是BSL-2级实验室，因此，这里需要对BSL-2实验室的建设问题讨论。
二、实验室建设的防护要求
实验室生物防护的基本要求，先是实验室在建设前要委托具有生物实验室的设计单位，进行科学合理的设计，并组织人员对设计方案进行性、科学性、实用性、选址布局的合理性及可行性等方面论证。其次，实验室的建设应由具有生物实验室建设经验的单位承建；再者，在建设过程中的施工质量及用材等方面进行监督与质量控制，应对建成的实验室进行工程质量的验收。生物实验室在平面布局上可通过分区物理隔离措施，将实验污染区和其它清洁区进行隔离，还有是通过气流组织的方式，使实验室形成单向气流(负压梯度)，即空气气流由清洁区向污染区方向流动，达到抑制感染性因子外泄的目的。
三、生物实验室布局要求
1、原则：
毒性强、感染性高的实验室应与办公区域隔离，成立或相对立区域；病原微生物实验室等尽量设在人员流动少的区域(新建立设置) 。
2、实验室流向：
由低毒实验室向高毒高感染性实验室过度，高度高感染性实验室应远离人员活动频繁区域，设在建筑物末端。
3、物流通道尽量分开
人员进出通道和物品通道分开；洁净物品与污染物品通道分开。
4、按项目设立实验室
HIV、PCR、 正常细胞、血清*学/动物、放射等，形成合理分区布局。
5、隔离：通风系统
布局：洁净与污染区域。
维护结构：维护结构隔离。
物理抑制设备：柜、负压通风柜等。
6、实验室层高：
建筑层高：3.5~4.0M
洁净实验室： 2.5~2.6M
生物实验室： 2.5~2.6M
一般实验室：2.7~2.8M
设备层高度(技术夹层)：1.2~1.5M
7、实验室走廊和门宽度：
走廊：1.6~2.0M
门：1.1~1.5M，留有设备门
8、实验室开间模数：
宽3.5~4.0M，净深： 6~9M，7~8M 为宜
9、选址考虑：
一般实验室没有要求；
高等级生物实验室应符合标准要求。

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  实验室自配试剂去离子水、缓冲液等和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌；尖、反应管等实验耗材应一次性使用。实验应在**净工作台内进行，工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品；实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染；吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染；装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
  PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量**单人单管，实现完全闭管操作；实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处；PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，**管盖紧闭。
  PCR实验室的污染应急处理方法：暂停所有实验操作；清理实验室内所有物品，寻找污染来源；加大实验室的通风；对实验室内所有表面台面、地面及墙面进行消毒；75%酒精空中喷雾；开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间4小时以上；以上措施每日进行，直至污染*；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。