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实验室管理使用规程
1目的建立实验室管理使用规程,**操作者正确使用。
2范围适用于实验室操作。
3责任者操作人员、实验室管理人员。
4内容
4.1实验室应严禁放置杂物,无关人员严禁入内。
4.2实验室应严格保持整洁,防止污染,定期消毒。实验室应每次使用前后用0.1%新洁尔灭溶液擦拭工作台面及可能污染的死角,湿拖地面,每周湿擦墙面及天花板。定期清洁空气净化器,做好消毒记录。无菌衣每周送供应室消毒。
4.3实验人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋,用75%棉球擦手,穿戴工作衣帽、口罩。进行无菌操作时,衣帽穿戴要整洁。帽子要将全部头发遮盖,口罩须遮住口鼻,并修剪指甲,洗手。
4.4将所需物品剥去牛皮纸及外包装,从传递窗移入操作间。所有进出实验室的物品需通过传递窗通道,并且需经过紫外线消毒或75%酒精消毒。
4.5**净工作台使用前开启紫外灯照射30分钟,使用时打开吹风净化工作台,操作完毕及时清理消毒。
4.6取无菌物品时,必须用无菌钳(镊),镊子剪刀等在每次使用前后,必须通过火焰灭菌冷却后方可使用。未经消毒的物品不可触及无菌物或跨越无菌区。器如需回抽时,应对着火焰吸入无菌空气。
4.7实验过程严格按照无菌操作规程操作,进行无菌操作时如器械、用物疑有污染或已被污染,即不可使用,应更换或重新灭菌。所有消毒火菌物品必须及时标明打开时间,并在规定时限内使用。实验完毕,整理检品及各种用具并清洁工作台面。
4.8细胞培养箱、离心机等实验仪器根据各自要求定期消毒。新配培养液等试剂送检无菌后使用。
4.9各种消毒灭菌剂根据其性能及产品说明与要求配置,并按要求定时测试浓度,**消毒灭菌效果。实验室定期进行洁净度测试检查沉降菌(在室内打开血琼脂平板30分钟,经37C培养48h),100级平均菌落数不得过1个/皿,如**过应进行清洁消毒。
中净环球净化可提供无菌实验室、细胞无菌实验室、净化工程的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规*设备,主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许,建议选用配置有照相系统的相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等,可随时拍摄并记录细胞生长情况。
用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,烘箱内温度一般要达到160℃以上,通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至100℃时,停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门,以免骤冷导致玻璃器皿破裂,应等温度自然下降至100℃以下后可开门。
体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,一般适生长温度为37℃,温差变化不应**过±0.5℃。温度升高2℃时,不利于细胞生存,温度达到40℃以上细胞将很快。因此可控温的恒温培养箱、CO2培养箱是佳选择。恒温培养箱:应选隔水式或晶体管式自控温培养箱,此类培养箱灵敏度高,温度控制较稳定;一般的恒温培养箱价格较*,其缺点是只宜于作密闭式培养。
CO2培养箱目前多数的细胞培养室已广泛使用,CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2,常用浓度为5%,易于稳定培养液pH,适用于开放或半开放培养;使用培养瓶时,为使培养瓶内与外界保持通气状态,可将瓶盖略微旋松,为避免细胞被污染,使用这种培养方式时,培养箱内空气必须保持清洁,需定期用紫外线照射或酒精消毒,同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养液蒸发,保持箱内相对湿度在。
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细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合,可使普通水纯化为纯水和**纯水的纯水装置使用非常灵活方便,可挂壁式、台式、可配储水箱、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉热源的超滤型纯水装置。
细胞培养时,通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机;若要做细胞沉降,需要使用80-100G离心力,因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求,有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。
冰箱是细胞培养实验室*设备,应不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁;一般包括普通冰箱、低温冰箱和温冰箱。普通冰箱:储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品,可短期保存组织样本;-20℃低温冰箱、温冰箱:用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂,如酶、血清等。
分析天平的度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平:取样量大于100mg宜选用度0.1mg的天平;取样量100-10mg,选用度0.01mg的天平;取样量10mg宜选用度0.001mg的天平。天平需要定期校准,可选择有自动校准功能的天平,方便维护。天平使用需要注意清洁,避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。
细胞冷冻储存器 :有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择,可配置有电子控制器的液氮储存器,实现冻存自动化;并可监测液氮水平和样品温度,确保样品温度始终处于设定温度点;可配置报警系统,设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警;同时具备热气体旁路系统,防止**-130℃的暖空气进入液氮罐,从而更有效地保护样品,防止容器内升温。另外,可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮,**样品*。
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实验室循环水冷却塔
冷却塔是将携带热量的冷却水在塔中与空气进行热交换,将热量传输给空气并散入大气环境中去的装置。
冷却塔有湿式冷却塔(简称湿塔)和干式冷却塔(简称干塔)之分。在湿塔中,空气与水直接接触,通过接触传热和蒸发散热,把水中的热量传输给空气。湿塔热交换效率高,水被冷却的限温度为空气的湿球温度。但需要有补给水的水源,以补充由于蒸发和吹风造成的水损失,并**稳定的水质。在缺水地区,只能用干塔。干塔中空气与水的热交换是通过由金属管组成的散热器表面传热,将管内水的热量传输给散热器外流动的空气。干塔热交换效率比湿塔低,冷却的限温度为空气的干球温度。这里主要介绍湿塔。
湿式冷却塔的分类:
湿式冷却塔的结构型式很多,基本上可以按照送入空气的方式和填料(通称淋水装置)的形式进行分类。根据送风方式的不同,冷却塔可以分为如下三种基本类型:
(1) 机械通风冷却塔,空气由送风机或抽风机引入冷却塔;
(2)风筒式冷却塔,由设有很高的抽风筒而形成通风,通称为自然通风式冷却塔;
(3) 开放式(或称大气式)冷却塔,利用风力和或多或少自然对流作用使空气进入冷却塔。
按照淋水装置的结构和达到扩大水与空气接触表面积的手段不同,冷却塔又可分为水膜式、点滴式和喷射式三种。此外,根据水与空气相对流动方向的不同,分为逆流式和横流式。也有些冷却塔,采用机械通风与自然通风、逆流式与横流式相结合的形式。
塔型的选择主要从循环水的温度范围、气象条件、传热效率、动力消耗、投资及环境保护等因素来考虑。在不同的工厂和不同的地理环境,起支配作用的因素是不同的,故不能一概而论。一般来说,机械通风冷却能**较稳定的冷却效果,它的冷却负荷可达(8~10)×104kcal/(m2•h)以上,比自然通风的冷却负荷约高一倍,它的造价低,占地面积也较少,在石油化工生产中,多采用机械通风冷却塔。自然通风冷却塔的主要特点是不设风机,因此动力消耗低,且维护方便;它的另一特点是因排气位置高,从而对环境的污染较小。
