中净环球净化科技有限公司可提供PCR实验室、核酸检测实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
实验室建设要求
一、生物实验室分级
根据实验室的设计特点、建筑结构和屏障设施等可将生物实验室分为四个防护等级,即生物防护水平一级(biosafety level,BSL-1)~生物防护水平(biosafetylevel,BSL-4),BSL-1 防护水平和隔离要求,BSL-4 防护水平和隔离要求。BSL-1、 BSL-2实验室属基础实验室,BSL-3 实验室为屏障实验室,BSL-4 实验室为高度屏障实验室。但使用频率,频繁的是BSL-2级实验室,因此,这里需要对BSL-2实验室的建设问题讨论。
二、实验室建设的防护要求
实验室生物防护的基本要求,先是实验室在建设前要委托具有生物实验室的设计单位,进行科学合理的设计,并组织人员对设计方案进行性、科学性、实用性、选址布局的合理性及可行性等方面论证。其次,实验室的建设应由具有生物实验室建设经验的单位承建;再者,在建设过程中的施工质量及用材等方面进行监督与质量控制,应对建成的实验室进行工程质量的验收。生物实验室在平面布局上可通过分区物理隔离措施,将实验污染区和其它清洁区进行隔离,还有是通过气流组织的方式,使实验室形成单向气流(负压梯度),即空气气流由清洁区向污染区方向流动,达到抑制感染性因子外泄的目的。
三、生物实验室布局要求
1、原则:
毒性强、感染性高的实验室应与办公区域隔离,成立或相对立区域;病原微生物实验室等尽量设在人员流动少的区域(新建立设置) 。
2、实验室流向:
由低毒实验室向高毒高感染性实验室过度,高度高感染性实验室应远离人员活动频繁区域,设在建筑物末端。
3、物流通道尽量分开
人员进出通道和物品通道分开;洁净物品与污染物品通道分开。
4、按项目设立实验室
HIV、PCR、 正常细胞、血清*学/动物、放射等,形成合理分区布局。
5、隔离:通风系统
布局:洁净与污染区域。
维护结构:维护结构隔离。
物理抑制设备:柜、负压通风柜等。
6、实验室层高:
建筑层高:3.5~4.0M
洁净实验室: 2.5~2.6M
生物实验室: 2.5~2.6M
一般实验室:2.7~2.8M
设备层高度(技术夹层):1.2~1.5M
7、实验室走廊和门宽度:
走廊:1.6~2.0M
门:1.1~1.5M,留有设备门
8、实验室开间模数:
宽3.5~4.0M,净深: 6~9M,7~8M 为宜
9、选址考虑:
一般实验室没有要求;
高等级生物实验室应符合标准要求。
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实验室自配试剂去离子水、缓冲液等和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌;尖、反应管等实验耗材应一次性使用。实验应在**净工作台内进行,工作台内应放置PCR的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品;实验的过程中选择合适尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染;吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染;装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,后加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作;实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处;PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭。
PCR实验室的污染应急处理方法:暂停所有实验操作;清理实验室内所有物品,寻找污染来源;加大实验室的通风;对实验室内所有表面台面、地面及墙面进行消毒;75%酒精空中喷雾;开启紫外消毒装置,延长紫外照射时间4小时以上;以上措施每日进行,直至污染*;用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测,连续3次均阴性后方可进行常规检测。
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PCR实验室设计要点
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室
所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此*条件要求。
二、组合形式PCR实验室
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,*造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
一些经验:
试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染;
可以通过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向室内。PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到**,且高度为地面铺装好后2600mm处。
如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间比走廊更有意义。
各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、与气流,形成单向流程的保护屏障,避免实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。
实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
中净环球净化科技有限公司提供PCR实验室、基因扩增实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
PCR检验试剂的准备—样品的制备—核酸或蛋白等目标物质的提取—PCR扩增实验—产物分析电泳、凝胶成像等或者荧光定量—结果判定—结果表达,出具检验报告。若采用“一步法”核酸提取技术,可在常温下快速裂解病原体,*加热煮沸和换管,通过简单的操作即可实现样本核酸的快速提取;若采用荧光定量PCR,则扩增和产物分析在同一个步骤中进行。
实验室的整体设计和运作直接影响到检测结果的准确度、稳定性和生物*等。PCR实验室整体解决方案包括规划设计管理、仪器试剂配套、技术服务支持、人员培训等多个方面,是一体化、多元化的系统解决方案。
PCR实验室建设:
1.主体结构:
主体为彩钢板、铝合金型材;室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决*污染、积尘、不易清扫等问题;结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。
2.标准的三区分隔和气压调节:
将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增、分析三个(或)四个立的实验区。整个区域有一个整体缓冲走廊。每个立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
3.消毒:
在三个实验区和三个缓冲区**部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。
4.机械连锁不锈钢传递窗:
试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在传递过程中不受污染(人物分流)。
5.地面
地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好,便于进行清扫,耐腐蚀。
6.照明
灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。
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